三晋卓越联盟·山西省2024-2025学年度高二10月联考（25-L-170B）生物答案

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种明发后表达载体的构建如图1所示，其中LB、RB分别为农杆菌中T-DNA的左、右边界，在最终载仕高体的T-DNA中启动子均为真核基因启动子，T-DNA以外区域的基因启动子均为原核基因黑三启动子，图2为几种限制酶的切割位点。据此回答下列问题：件物SpeIMsp、INhe I Spe I BamH I NLSNLS第gRNA动子a十启动子Cas9潮霉素抗性载体1RB载体2LB氨苄青霉素抗性卡那霉素抗性F3F1gRNA启动子Cas9潮霉素抗性RBFF4LB最终载体卡那霉素抗性本公四个#中国代图15Spe I5'..ACTAGT..-3'3'-...TGATCA...-5'Nhe I 5'-...GCTAGC...-3'基GATG箭头示酶→Msp I5'-..CCGG...-3切位点北3'-..GGCC...-5'黄↑BamH I 5'-.GGATCC...-3'3'-...CCTAGG...-5'图 2 （1）gRNA和Cas9蛋白的作用分别类似基因工程中的酶和酶，Cas9蛋白通过催化键的合成发挥作用。位：I/cm²（2）将gRNA和Cas9蛋白的基因插入到Ti质粒的T-DNA中的原因是中出的将载体1和载体2构建成最终载体所用的限制酶为。最终载体中gRNA基因还可能位于启动子a、b之间，·a)。据此回答下列问题选用图中作引物进行 PCR可以判定其拼接位置。（3）最终载体除图中元件外，还应具有（填写两种）元件。图中gRNA 和Cas9蛋白基因转录时模板链为（选填“DNA的同一条单链”“DNA的两条不同单链""DNA的任意单链”）。（4）导入最终载体后，对农杆菌和小麦细胞进行筛选，需要培养基中分别添加。从个体水上验证小麦的MLO基因改造成功的方法是23.（13分）黑麦1R短臂上带有抗条锈病（M基因）等多种抗性基因，能易位到小麦1B染色体长臂。科研人员以二倍体黑麦自交系K（2n=14，染色体组成为RR）作父本，以六倍体普通小7为该生态系统的部分能量高三生物第9页（共10页）时体第，原因自